EXTRACCIÓN ADN en muestras orales
(MasterPure™ Complete DNA and RNA Purification EPICENTRE)
- Centrifugar durante 10 minutos a 10000 rpm y retirar el sobrenadante (nos quedamos con el pellet celular)
- Añadir 300µl Tissue and Cell Lysis Solution y 33ul de Lysozima
- Vórtex 10 segundos e incubar a 37ºC durante 30 minutos
- Añadir 1µl proteinasa K
- Vórtex e incubar a 65ºC durante 18 minutos
- Enfriar la muestra a 37ºC
- Añadir 1µl RNAse A
- Incubar a 37ºC de 30 minutos a 1.5h, mínimo debe estar 30 minutos
- Enfriar en hielo 3 minutos
- Añadir 175µl de MPC protein precipitation
- Vórtex 10 segundos y centrifugar a Vmáx. durante 10 minutos (si el pellet luego de centrifugar está suelto añadir 25 µl y volver a centrifugar)
- Pasar el SOBRENADANTE a un tubo limpio
- Al sobrenadante anterior añadir 500µl de isopropanol invertir el tubo 40 veces para mezclar bien
- Centrifugar Vmáx. durante 10 minutos
- Nos quedamos con el PELLET, descartamos el sobrenadante
- Añadir 100 µl de etanol 70%
- Centrifugar Vmáx. durante 10 minutos a 4ºC
- Eliminar el sobrenadante
- Dejar secar durante 10 minutos el pellet
- Añadir 25 µl de agua estéril (RNAse y DNAse FREE), dejar a Tª amb durante una hora y a 4ºC o/n
